90%(V/V)丙酮;饱和碳酸镁溶液;标准chla;10%(V/V)盐酸,即1.MHCL。(mlHClinmlde-ionizedwater)
.采样(1)用蒸馏水充分洗涤过滤系统,放上GF/F滤膜,悬紧。
()量取一定体积的水样,加入1滴管饱和碳酸镁溶液,过滤(50span=""kPa)(避光,过滤时间小于0min):将过滤后的滤膜对折后放入铝铂袋中,保存于液氮罐或低温冰箱。
注:因测量仪器选用浮游生物组TunerTrilogy荧光仪,检测灵敏,过滤的水样体积不需要太多,近岸00ml左右,大洋-0ml。
.测定(1)测定前一天,将样品膜(5mm)放入加有5ml90%丙酮溶液提取瓶内,盖紧,摇荡,立即放于低温(?0℃)冰箱内,提取1-4小时。若是47mm的滤膜则需要用10ml的%丙酮。终浓度90%。
()配制不同浓度的标准叶绿素a溶液,供各量程档校准用。(标准是什么?浓度范围和间隔以实测叶绿素荧光值为参考)。
()预热荧光光度计约0min。
(4)用标准叶绿素a溶液进行预扫描,确定叶绿素a的最大激发与最大发射波长。(40//)
(5)设置仪器的激发和发射波长于叶绿素a的最大激发与最大发射波长。
(6)换算系数的确定:将上述不同浓度的标准叶绿素a溶液,在不同量程档上进行酸化前后荧光值的测定,各量程档的换算系数Fd的计算公式:
式中:Fd——量程档“d”的换算系数,mg/m;
?(Chla)——叶绿素a的标准工作溶液的浓度,mg/m;
R1——酸化前的荧光值;
(7)测定前取出样品放在室温黑暗处约半小时,使样品温度与室外温一致。
(8)每批样品测定前后,以90%丙酮作对比液,测出各量程档的空白荧光值F01和F0。
(9)将提取瓶内上清液倒入1cm比色皿中,选择适当量程档,测定样品的荧光值Rb;加滴10%盐酸于比色皿中,0秒后测定其荧光值Ra。
.4样品中chla的计算式中:V1——提取液的体积(ml);
V——过滤水样的体积(ml);
Fd——量程档“d”的换算系数,mg/m;
R1——样品酸化前的荧光值;
R——样品酸化后的荧光值。
若是采用TunerTrilogyChlaA模块测量,叶绿素的计算公式为:
Chla(mg/m)=Fm/(Fm-1)*(R1-R)*Kx*V1/V
式中:Fm----酸化因子,R1/R
Kx---换算因子,梯度浓度/R1
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